現在、多能性幹細胞 (iPS細胞、ES細胞) の接着培養には足場材が使用されていますが、新たにPVBポリマーと短鎖ペプチドからなる化学合成足場材を開発しました。
この足場材は、従来の足場材とは違って生物由来成分を含まないため、安定性が高く、室温保管が可能です。今後、臨床用ヒト多能性幹細胞の自動大量培養への活用が期待できます。

アキレス腱を損傷したラットにiPS細胞から誘導した腱細胞を移植すると、アキレス腱の再生が促進され、運動機能が優位に回復することを示した論文です。 当財団では、iPS細胞から腱細胞が作られる過程を詳細に調べるシングルセルRNAseq(1細胞レベルの遺伝子発現)解析の技術支援を行いました。

臨床用のiPS細胞ストックから作製したドパミン神経前駆細胞（ドパミン神経になる前の細胞）を使用した、パーキンソン病に対する細胞移植治療の医師主導治験のための非臨床安全性・有効性試験の実施報告です。

財団で作製したHLAをホモで持つiPS細胞から作製した網膜色素上皮細胞を、HLA型が一致している滲出型加齢黄斑変性症の患者さんに移植。免疫抑制剤を使用せず、局所的にステロイドを投与し、移植後の安全性と免疫反応を評価した際のまとめです。

臨床用iPS細胞ストックから作製したNK/ILC細胞（自然免疫細胞の一種）を使用した、卵巣がんに対するCAR-NK/ILC細胞治療の非臨床安全性/有効性の実施報告です。　

2018年前半時点での再生医療用iPS細胞ストックプロジェクトの進捗状況を、製造管理・品質管理を中心に記載した総説です。

iPS細胞を用いた移植医療の際に想定される拒絶反応のリスクを軽減するため、ゲノム編集技術を用いて、拒絶反応が起こりにくいiPS細胞を作製した際のまとめです。

当財団では、細胞調製施設(FiT)を中心とし、臨床用iPS細胞のグローバルな品質規格を定めるための活動を行っています。本論文内ではこの規格をガイドラインとしてまとめました。

2018年6月に、国際学会（the International Alliance for Biological Standardization）での議論に参加した際の報告です。多能性幹細胞の製造と試験に関する内容をまとめています。

心筋への分化抵抗性株の遺伝子発現解析

HLAホモストックを含む様々なiPS細胞株（計34種類）を心筋に分化誘導させた結果、株によって、分化誘導の効率に違いが見られた。遺伝子発現を調べた結果、CHCHD2遺伝子の発現低下により、心筋や神経への分化効率が低下することが示唆された。今後、こういった遺伝子の発現を調べることで、高品質のiPS細胞を識別する１つの手段になることが期待される。

Overall 3D culture system　自己体細胞～iPS細胞～分化細胞　一気通貫 3D 培養システムの開発

iPS細胞を浮遊状態で樹立し(3D-iPSCs)、従来の接着培養(2D)で樹立したiPS細胞と比較した。その結果、2D/3DでiPS細胞の特性に顕著な差は認められなかった。また、iPS細胞の樹立から、拡大培養・心筋分化までを3D浮遊状態で実施可能であることを確認し、これにより、全行程を閉鎖型の自動培養装置で実施するための基盤が構築できた。

アテロコラーゲンのマイクロキャリアを用いたiPS細胞の培養とその評価

iPS細胞を3D浮遊培養する手段として、マイクロキャリアの利用が考えられる。しかし、iPS細胞をマイクロキャリアのような曲面上に接着させることは、これまで困難であった。本研究では、アテロコラーゲンマイクロキャリアを用いることで、キャリア上でiPS細胞の樹立や拡大培養が可能であることを見出した。これにより、リアクターを用いてiPS細胞を大量培養するための基盤技術を構築した。

iPS細胞の自動培養装置の性能評価と活用可能性の探索事例

自動培養装置（パナソニック社製）を用いて、様々な培養条件でiPS細胞を培養し、自動培養装置での培養・品質管理を行うことのメリット・デメリットを確認した。今後、iPS細胞製造の自動化に向けて、機器やプロセスの改良を進めると共に、自動化装置に適した作業の抽出など、さらなる検討を進めていく。

臨床用HLAゲノム編集iPS 細胞株の製造と技術的課題

ゲノム編集技術により、HLA-A/HLA-B/CⅡTAの３つの遺伝子を改変した、免疫拒絶リスクを低減したiPS細胞を作製した。この中で、ゲノム編集に伴い生じる課題（染色体異常や遺伝子欠損など）を見出し、これらの課題を克服するための検査方法を確立した。しかし、臨床用iPS細胞の品質管理には時間と労力が必要なため、効率よく作業を進めるため、一部の作業を自動化するなど、継続的な技術開発が必要である。

細胞培養液、細胞入り容器へのＸ線照射の影響

再生医療において、施設内の衛生管理は最も重要なポイントの一つです。
分注された培養液や凍結細胞バイアルのように、エタノールなどの消毒液による拭き取り以外の方法では除菌が困難な材料があります。
ここでは、低エネルギー電子線照射により材料の表面のみを除菌する方法に着目し、細胞を培養するための培養液や細胞そのものに対するX線（電子線照射により副次的に発生する微量のX線）の影響について調べた結果をまとめました。

Single-cell cloning of human induced pluripotent stem cells automation and protocol optimization

医療用(臨床グレード)のiPS細胞を製造するための課題の一つに、単一細胞クローニングがあります。 単一細胞クローニングとは細胞の集団から１つの細胞を取り出し、その１つの細胞と同じ細胞を増やすために、培養していく作業のことです。 ここでは、Cytena UP.SIGHT™装置（Cellink社）を用いたシングルセルクローニングのプロセス開発における進捗状況を報告します。 この機械を使うことによって、容易に単一の細胞を取り出すことができます。

多能性幹細胞培養における増殖優位性の獲得抑制の試み

ES細胞やiPS細胞などの多能性幹細胞においては、遺伝子に変異が入ることによって増殖のスピードが速くなり、細胞集団の大部分を占めてしまう「増殖優位性」という現象が知られています。本発表は、通常の酸素濃度(20％)と、それより低い5％の酸素濃度でES/iPS細胞を培養し、増殖速度や遺伝子発現の変化を比較した結果を示しています。

網羅的単一細胞遺伝子発現解析を用いたiPS細胞樹立プロセスの検討

血液細胞からiPS細胞を樹立し、さらにiPS細胞の継代培養を繰り返していく中で、遺伝子の発現がどのように変化していくかを、網羅的な遺伝子発現解析の手法であるSingle cell RNA Sequenceで調べた結果を示したものです。

HLAノックアウトiPS細胞の臨床応用を目指した作製条件検討~オン/オフターゲットの解析

他家移植の課題である免疫拒絶を回避するため、当財団では、HLA遺伝子の一部を改変（編集）したiPS細胞ストックの開発を精力的に進めています。本発表ではその製法および品質評価の条件検討を詳細に行い、目的とするHLA遺伝子編集のなされたiPS細胞株が得られたことを報告しています。

Large-scale expansion of iPS cells in Terumo BCT Quantum® closed automated cell culture system

これまで血球細胞や間葉系幹細胞などの大量培養で実績のある自動培養装置「Quantum®」（Terumo BCT）を用いてiPS細胞をうまく増殖させることが出来るか検討を行った結果、約50倍に増殖可能であったことを報告したものです。

iPS細胞維持培養の独自培地の開発

再生医療に用いるiPS細胞の維持培地は、多くが市販のものを使用していますが、(1)すべての成分が開示されていない、(2)供給者の事情などにより供給が不能となる可能性がある、といったリスクが存在しています。そこで、永続的かつ低価格での供給を目指して、当財団にてiPS細胞の維持培地の作製を行いました。本発表では、この当財団作製培地と市販培地を用いて、増殖能や心筋分化能の比較検討を行った結果を示しています。

簡易閉鎖型培養装置によるiPS細胞の培養

再生医療に用いる細胞製造のコストダウンを達成するためには、大規模な製造設備を必要としない、小型の閉鎖系自動培養装置の開発が非常に重要です。本発表は、その設計およびプロセスを構築するための第一段階として、簡易型の培養装置を試作し、iPS細胞の培養を行った結果を報告するものです。

均一なiPS細胞を培養するための新たな足場材とコーティング方法を開発する目的で、様々なコーティングをしたプレート（積水化学工業株式会社製）を用いてiPS細胞を培養しました。その結果、コーティングパターンに合った均一な大きさのiPS細胞のコロニーが観察され、また未分化状態も維持されていました。

細胞製造を指向した多能性幹細胞用新規化学合成足場材の開発

iPS細胞の品質向上や製造の安定性を目的に検討を行った結果、従来にない高い細胞親和性を有する樹脂を見出すことに成功しました。この樹脂に接着したiPS細胞は、良好に増殖することができ、また未分化能状態も維持されていました。

他家移植の課題である免疫拒絶を回避するため、当財団で精力的に開発を行っているHLA遺伝子の一部を改変（編集）した新たなiPS細胞ストックについて、その作製方法やスクリーニング手順、評価結果を詳細に報告したものです。

2020年4月、当財団は、iPS細胞研究所（CiRA）から医療用iPS細胞の製造、品質評価、研究開発を行う部門を分離して設立されました。本発表は、CiRAの頃から行ってきた再生医療用iPS細胞ストック事業の紹介や財団設立の理由、また今後の展望などを山中理事長が講演したものです。